أساسيات تحضير البيئات الميكروبية

تحضير البيئات الميكروبية

تعريف البيئة الميكروبية :
تعرف البيئة على أنها الوسط المناسب لنمو الأحيـاء الدقيقة و تتوفر فيها متطلبات النمو الأساسية.




الوسط الغذائي قد يكون بسيط او معقد التركيب وفي كل صورة يعمل على توفير الطاقة والوحدات الاساسية لبناء اجزاء الخلية حيث تعتمد غالبية الدراسات والبحوث الميكروبية علـى استعمال بيئات غذائية مختلفـة ، وهذه البيئات إن لم تكن متماثلة تماما مع البيئات التي تعيش فيها أو عليها هذه الكائنات في الطبيعة فيجب أن تكون قريبة الشبه منها من حيث توفير الاحتياجات والمتطلبات الغذائية اللازمة لتنميتها

الغرض من استخدام الاوساط الغذائية (البيئات).
- تنمية وحفظ الانواع المختلفة من الاحياء الدقيقة مثل البكتيريا- الخمائر- الفطريات.
- دراسة تاثير الكائنات الحية الدقيقة على المواد الغذائية.
- إنتاج و تكوين بعض المواد و المركبات من خلال بعض التخمرات الصناعية.
- تصنيف (البكتيريا- الخميرة- الفطريات) ودراسة صفاتها المزرعية.

الشروط الواجب توفرها في الوسط الغذائي

1- توفر مصدر للكربون مثل السكروز- الجلوكوز- اللاكتوز - مالتوز ـ دكسترين- مانيتول.

2- توفر مصدر للنيتروجين العضوي مثل الببتون - التربتون -مستخلص اللحم - مستخلص الخميرة- اليوريا والأحماض العضوية أواللاعضوية مثل أملاح الامونيا والنترات.

3 - توفر كميات مناسبة من الاملاح المعدنية.

4- مصدر للرطوبة: الماء المستخدم يجب أن يكون مقطراً وليس ماء الصنبور وذللك لخلوه من الأملاح المعدنية والمتواجدة في ماء الصنبور التي تتفاعل مع الفوسفات الموجودة في مكونات البيئة لتكون أملاح غير ذائبة

5- تعديل درجة حموضة البيئة حيث تعيش الفطريات في وسط حامضي والبكتريا في وسط قاعدي قريب من التعادل (يضاف احادي أو ثنائي صوديوم أو بوتاسيوم فوسفات لضبط الرقم الهيدروجيني وجعله ثابتاً.

متطلبات نمو الميكروبات
 
متطلبات صغرى Micro elements
منجنيز- زنك- كوبلت- نحاس

متطلبات كبرى Macro elements
كربون - اوكسجين - نيتروجين - أيدروجين - كبريت - فوسفور - البوتاسيوم - الكالسيوم - المغنسيوم - الحديد

تقسيم البيئات

على أسـاس القوام

بيئـات سائلة Liquid media

لا تحتوى على أجار

بيئـات نصف صلبة Semisolid media

تحتوى على أجار بنسبة اقل من 1%

بيئات صلبة Solid media

تحتوى على أجار بنسبة 1.5- 2%



على أساس الوظيفة او الغرض

البيئات الخاصة Special media

البيئات العامة (الغنية بالمغذيات) Nutrient media


تركيب البيئات العامة

بيئة الآجار المغذي Nutrient agar
تحضير 1 لتر يؤخذ الوزن بالجرام

المكون	الوزن بالجرام
Beef extract	3
Peptone	5
Agar	15

بيئة مرق او أجار عد الاطباق Plate count agar or broth
تحضير 1 لتر يؤخذ الوزن بالجرام

المكون	الوزن بالجرام
Yeast extract	2.5
Tryptone	5.0
Glucose	1.0
Agar	15

بيئة المانيتول Mannitol Salt Agar (MSA)
الخاصة بعزل Staphylococcus sp


 تحضير 1 لتر يؤخذ الوزن بالجرام
 

المكون	الوزن بالجرام
Beef extract	1.0
Peptone	10.0
Sodium chloride	75.0
Mannitol	10.0
Agar	15.0
Phenol red	0.025

 

نمو وتخمير المانيتول

نمو مع عدم تخمير المانيتول

بيئة ماكونكي MacConkey Agar (MAC): Gram negative bacteria (G-)
  تحضير 1 لتر يؤخذ الوزن بالجرام
 

المكون	الوزن بالجرام
Bacto peptone	17.0
Proteose peptone	3.0
Lactose	10.0
Bile salt	1.5
Sodium chloride	5.0
Agar	13.5
Neutral red	0.03
Crystal violet	0.001

 بيئة -Eosin Methylene Blue (EMB) Agar: G-
  تحضير 1 لتر يؤخذ الوزن بالجرام

المكون	الوزن بالجرام
Peptone	10.0
Lactose	10.0
Di potassium phosphate	2.0
Agar	15.0
Eosin Y	0.4
Methylene blue	0.065

خطوات تحضير البيئات الميكروبية :

1. وزن المكونات المختلفة بدقة او في حالة البيئات المجهزة يوزن من البيئة الوزنة الدونة على العبوة بدقة.

2. إضافة المكونات في دورق مخروطي بحجم مناسب بحيث عند الحاجة لتحضير 1 لتر من البيئة يجب استعمال دورق سعة 2 لتر على الأقل ان لم يكن اكبر من ذلك.

3. إضافة الماء المقطر الى البيئة حتى الحجم المناسب ثم بدء عملية الطبخ بالتسخين فوق مسخن بشكل مباشر او يفضل طبخها في حمام مائي يغلي حتى تمام تجانس وذوبان كل المكونات وعدم وجود مكونات عالقة او متصلبة.

4. تعقيم البيئة في معقم تحت درجة حرارة ملائمة والتي تكون غالبا 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة باختلاف اشكال المعقمات، ويراعى غلق الدورق بالقطن ورقائق الالومنيوم.

 5. تبرد البيئة الى درجة حرارة الغرفة وتحفظ لحين الاستخدام، وعند اعادة استخدامها تسخن حتى تذوب مكوناتها من جديد ثم تبرد الى درجة حرارة 55 درجة مئوية وتصب في الاطباق او الانابيب.